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高速逆流色谱是连续液-液分配色谱

发布时间:2010-12-23   来源:11317仪器商城  

高速逆流色谱
  高速逆流色谱是连续液-液分配色谱,其固定相通过重力场和离心力作用保留在分离柱内,而流动相按液-液分配色谱的原理将要分离、制备的组分一一带出色谱柱外检测并收集。高速逆流色谱避免了固定相对被分离组分理化性质的影响,也避免了不可逆吸附。
  利用高速逆流色谱可从粗制品中一步制备获得高纯度单体,适合用于工业上大规模制备。也可广泛用于生化工程、医药、天然产物、环境分析、食品等到领域中的微量分析。
  聚四氟乙烯管缠绕在支架上形成多层螺旋管做分离管,共有三个分离管串联在一起,分离管由自转轴控制转速,而三个分离管又共同安装在带有公转轴的主机上。主机公转轴的转速可与自转轴的转速相同或不同。调节公转轴的转速和自转轴的转速使分离柱内固定相和流动相达到平衡后,就可进样到色谱系统中分离。
  高速逆流色谱分离原理:在B点主机公转的离心力与3根分离管自转的离心力方向相反,流动相与固定相混合在一起,固定相和流动按分配原理分配样品中的组分。
  高速逆流色谱旋转时影响固定相在分离管中的保留率,保留率越高分离效果越好。
             固定相占分离管的总容积-排出的固定相体积   
      保留率=────────────────────
                  固定相占分离管的总容积
  进入分离管流动相流动的方向可与主机转动的方向相同或相反。两者的方向相同,或者主机反方向转动,而流动相正方向流动,固定相保留率高,分辨率也高。同时,固定相的保留率与主机转速和流动相的流速也有很大的关系。
  高速逆流色谱对混合样品中组分的有交分离依赖于样品各组分分配系数的差异。影响组分分配的因素很多,也包括洗脱液体第的组成、pH值、离子强度等。在蛋白质的分离中,pH值的影响最大。
  应用pH9.2的聚乙二醇2000-磷酸盐体系分离细胞互C、血红蛋白和溶菌酶。3种蛋白质按照其分配系数的大小按顺序流出。细胞互C和溶菌酶的Rs达到1.5,而血红蛋白分配系数大,基本上完全分配在固定相中,难以被洗脱。在前两咱蛋白质被完全洗脱后,以固定相反向流动洗脱血红蛋白。显示出因反相流动洗脱会带出部分流动相,色谱基线线波动较大。

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